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论著·基础研究 | 更新时间:2017-06-27
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促血管生成素-2过表达重组腺病毒载体的构建

广西医学 2017第39卷06期 页码:849-851

作者机构:广西医科大学第一附属医院血液内科,广西医科大学第一附属医院老年心内科

基金信息:【基金】国家自然科学基金(81360036,81160075);广西自然科学基金(桂科自0728124);广西医药卫生科研课题(Z2014035)

DOI:10.11675/j.issn.0253-4304.2017.06.27

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目的 构建小鼠促血管生成素-2(Ang-2)基因过表达重组腺病毒载体。方法 化学合成小鼠Ang-2编码序列,经PCR扩增、鉴定后连接至穿梭质粒。将含目的基因的重组质粒转化DH5α感受态细胞,所得阳性转化子经电泳分析并测序鉴定。将携带目的基因的穿梭质粒与辅助包装质粒共转染人胚肾细胞系HEK293细胞,反复冻融获取重组腺病毒,终点稀释法测定病毒滴度,重组腺病毒转染HEK293细胞并提取蛋白,采用免疫印迹法分析Ang-2蛋白的表达。结果 PCR产物电泳分析可见大小约1.5 kp的特征性条带,基因序列显示测序结果与GenBank提供的Ang-2序列一致,经 HEK293细胞包装后腺病毒滴度为1×108.8 pfu/ml,免疫印迹法分析可见大小57 kD特征性条带,即重组腺病毒可成功表达Ang-2蛋白。结论 Ang-2基因重组腺病毒载体可成功构建。

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